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【微课堂】自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂核心性能浅析

作者：浙江泰林生物技术股份有限公司 2024-03-26T00:00 (访问量:21620)

压力蒸汽灭菌因其高效、适用范围广等特点，广泛应用于医疗、制药等行业。压力蒸汽灭菌效果需通过验证来确认。2020版《中国药典》指出，生物指示剂的被杀灭程度，是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。

图1：自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂

应用场景-压力蒸汽灭菌锅验证

生物指示剂可分为载体型，芽孢悬液和自含式三种。其中自含式生物指示剂自带培养基，可在普通环境下接种，使用非常方便。

本文就泰林自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂产品的特点及核心性能进行探讨。

图2：泰林自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂结构图

培养基性能

培养基性能包含无菌性能和恢复生长性能两方面，无菌性能不合格可能产生假阳性，而培养基恢复生长性能不合格可能导致假阴性，影响灭菌验证结果判断。无菌性能要求生物指示剂内含的培养基培养后仍呈阴性；恢复生长性能要求生物指示剂内含恢复培养基经过灭菌后接种不大于100cfu的嗜热脂肪地芽孢杆菌，置于55℃～60℃培养箱培养48h，应呈阳性结果。

图3：指示剂培养结果（紫色为阴性黄色为阳性）

菌种

国内外法规均指出，嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）可以用来监测压力蒸汽灭菌效果。该菌种营养细胞呈长杆状、圆端，多数为单个、少数成对或链状排列，细胞壁为革兰阳性结构，芽孢呈椭圆或柱状，芽孢无致病性、对压力蒸汽的抗力非常强。

芽孢率

根据2020版《中国药典》9207 <灭菌用生物指示剂指导原则>的要求，生物指示剂的芽孢含量应在90%以上。可将生物指示剂的载体置于适量的稀释液中通过搅拌、涡旋、超声波（振荡器）、离心，或其他适宜的方法方法处理，获得芽孢悬液，再通过芽孢染色观察视野中芽孢和菌体的比值进行判断。

图4：显微镜下芽孢染色图

总芽孢数

生物指示剂的总芽孢数应在标示值的50%～300%。可将纸片载体从初级包装中取出，置于适量的稀释液中，纸质载体通过搅拌、涡旋、其他不易破碎的载体通过超声波（振荡器）、反复振摇，或其他适宜的方法处理，再95℃~100℃热激活处理15min后转移至0℃～4℃的冰水浴中迅速冷却至室温，用灭菌纯化水进行10倍系列稀释，采用倾注法或涂布法进行芽孢计数。

抗性（D值）

生物指示剂对灭菌过程的挑战必须超出物品的微生物负荷量及耐受性，以保证灭菌程序有更大的安全性。一般来说，生物指示剂的抗性用D值来表示。D值是指将试验微生物杀灭90% 所需的灭菌时间或灭菌剂量。自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂需使用抗力仪进行D值测定，通过阴性分数法或残存概率法计算其D值，灭菌温度一般为121℃，D值应处于1.5min~3min的范围内。

图5：泰林压力蒸汽灭菌生物指示剂抗力仪

培养耐受性

自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂需在55℃~60℃下培养，在必需的培养周期内，培养基的挥发难以避免。

市场上不少自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂培养前需使用封口膜或其他封口材料对透气孔进行封堵，否则培养周期内培养基迅速蒸发，培养结果难以观察。

故培养耐受性也是自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂不可忽视的核心性能。

图6：不同厂家的自含式生物指示剂培养基蒸发率测试

性能优势

①专利设计的二段式组合帽塞，培养48小时水分挥发不足10%，解决了培养不耐受的难题；

②优良透析纸选材，兼顾有效阻菌性与高透气性；

③培养基性能、芽孢率、芽孢含量、D值经过多次验证和测试均符合要求；

④高透明度瓶体，便于观察，结果判断准确；

⑤含化学指示剂标签，灭菌后差异明显，便于分组判断使用方便。

图7：泰林自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂操作方法

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