产品基本信息
产品名称：Portelite 荧光法RNA定量试剂盒
英文名称：Portelite™ Fluorimetric RNA Quantitation Kit*Optimized for Cytocite™ and Qubit™ Fluorometers*
产品货号：17658 17659
产品规格：100 Tests 500 Tests
储存条件：保存在冰箱-15℃干燥
保质期：12个月
检测和定量少量 RNA 对于各种生物学应用极为重要，例如在进行 Northern 印迹分析、S1 核酸酶测定、RNase 保护测定、cDNA 文库制备、逆转录之前测量体外转录 RNA 的产量和测量 RNA 浓度PCR、差异显示PCR。测量核酸浓度常用的技术是测定 260 nm 处的吸光度。基于吸光度的方法受到蛋白质、游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰的限制。使用敏感且选择性的荧光核酸染色剂可以缓解这种干扰问题。 StrandBrite™ RNA 定量试剂是一种超灵敏荧光核酸染色剂，用于定量溶液中的 RNA。 StrandBrite™ RNA 定量试剂可使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 荧光计检测低至 5 ng/mL 的 RNA。我们的 StrandBrite™ Green 荧光 RNA 定量试剂盒包括我们的 StrandBrite™ Green 核酸染色剂和优化且稳定的实验方案。它提供了一种定量溶液中 RNA 的便捷方法。
产品光谱图
激发(纳米)：509
发射(纳米)：527
成分
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成分A：StrandBrite 绿色 |
0.25 mL（在DMSO中为200X） |
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成分B：测定缓冲液 |
1瓶（50ml） |
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成分C：RNA标准＃1 |
1 mL（RNA：0 ng / µL） |
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成分D：RNA标准＃2 |
4 X 250 µL（RNA：10 ng / µL） |
实验方案
样品分析方案
概述
准备 StrandBrite RNA 工作溶液
将 190 µL StrandBrite™ RNA 工作溶液添加到每个 0.2 mL PCR 管中
将 10 µL RNA 标准品或测试样品添加到每个管中
室温孵育2分钟
使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 荧光计检测荧光
注：在开始实验之前，将所有套件组件置于室温下。
溶液配制
StrandBrite™ RNA 工作溶液
将 StrandBrite Green（组分 A）在测定缓冲液（组分 B）中稀释 200 倍。例如，要为 8 个样品准备足够的工作溶液，请将 5 µL StrandBrite Green（组分 A）添加到 1 mL 测定缓冲液（组分 B）中。
注意 用箔纸覆盖工作溶液或将其置于黑暗处，以避光。我们建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得最佳效果，该溶液应在制备后几小时内使用。
实验方案
可接受的样品体积范围为 1~20 µL，具体取决于 RNA 样品的估计浓度。推荐样品体积为 10 µL，RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内。如果使用其他样品体积，请调整浓度计算中的稀释系数。
以下实验方案是基于 10 µL 样品体积、RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内生成的。
1.将 190 µL StrandBrite Green 工作溶液添加到每个 CytoCite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。 注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。
2.将 10 µL RNA 标准品 #1 和 #2 或测试样品添加到每个管中，然后通过涡旋 2~3 秒进行混合。
3.将所有管在室温下孵育 2 分钟。
4.将样品插入 CytoCite™ 或 Quibit™ 并用绿色荧光通道检测荧光。请遵循适用于 CytoCite™ 荧光计的程序。
标准校准曲线的制备（可选）
对于 StrandBrite™ 检测，您可以选择使用 RNA 标准品制作校准曲线。以下是生成定制 RNA 标准曲线的简要方案：
1.使用 Assay Buffer 进行 1/3 系列稀释，使用 RNA Standard #2 获得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 标准稀释液。
2.将 190 µL StrandBrite™ Green 工作溶液添加到每个管中。
3.将 10 µL RNA 标准品或测试样品加入每个管中，然后涡旋 2~3 秒进行混合。
4.将反应物在室温下孵育 2 分钟。
5.将样品插入 CytoCite™ 并用绿色荧光通道检测荧光。
产品实验图
图1。用 StrandBriteTM 绿色荧光 RNA 定量试剂盒生成 RNA 标准曲线。用绿色荧光通道定量荧光强度，用线性拟合法计算回归模型。