干货分享 | 一套搞定,小翌助您跑出完美的电泳图!-技术前沿-资讯-生物在线

干货分享 | 一套搞定,小翌助您跑出完美的电泳图!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2024-01-12T00:00 (访问量:37087)

 

核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,是分离、鉴定和纯化核酸的主要方法。核酸电泳一般有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖作为支持介质的一种电泳方法,常用于DNA切胶回收,DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒是否切开等等,因其分离范围较广,在实验室中应用广泛。

 

 

01

电泳缓冲液制备

  

电泳缓冲液是核酸凝胶电泳系统的一个重要组成,主要作用是维持合适的pH,使溶液两极的pH保持基本不变。且具有一定的导电性,利于核酸分子从负极迁移到正极。其成分及其离子强度影响物质的电泳迁移率,内含的EDTA可螯合Mg2+等二价阳离子,防止电泳时激活DNA酶及Mg2+与核酸生成沉淀,保护样本的理化性质不变。

 

核酸电泳缓冲液分为TAE缓冲液、TEB缓冲液、TPE缓冲液,因为双链线状DNA在TAE的迁移率较其他两种缓冲液更快,因此实验室多使用TAE电泳缓冲液。

 

50×TAE Buffer配制单如下表所示:(使用时需稀释50倍)

试剂

称量值

方法

Tris(氨基丁三醇)

242 g

置于1 L烧杯中,加入约600 mL去离子水,充分搅拌均匀;

Na2EDTA·2H2O

37.2 g

CH3COOH(冰乙酸)

57.1 mL

充分溶解后,用NaOH调pH至8.3,加去离子水定容至1 L。

 

02

配制琼脂糖凝胶

  

琼脂糖是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体,提取自琼脂或者含琼脂的海藻。琼脂糖的基本参数包括:硫酸盐含量、凝胶强度、胶凝点、电内渗(EEO)等。合适的琼脂糖是核酸电泳跑出好胶的重要前提,翌圣高质量琼脂糖(Cat#10208ES),胶孔清晰、胶体不易断,具备纯度高(硫酸盐含量低)、凝胶强度大、胶凝点相对高(常温条件下凝固快)、电内渗低等特点,是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择。

 

 

产品优势

严格控制琼脂糖参数,保证凝胶质量

 

电渗值低(EEO≤0.13),条带分离效果好,分得开、跑得快;

注:0.75%琼脂糖凝胶上样:1kb ladder,1%琼脂糖凝胶上样:100 bp ladder、1kb ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker,2%琼脂糖凝胶上样:100 bp ladder、2000 DNA Marker、5000 DNA Marker;上样量:Marker 原液 2 μl 稀释 5 倍后上样 10 μl;0.75%、1%、2%琼脂糖凝胶电泳程序分别为:115V,45min;130V,40 min;130V,50 min。

 

琼脂糖凝胶电泳必然离不开核酸染料的加持,核酸染料一般是芳香环化合物,这些化合物能够与DNA中的核苷酸发生静电作用,从而将核酸染料吸附到DNA分子表面。分子中含有的环结构可以吸收紫外线或蓝光,并发出荧光。翌圣核酸染料YeaRed/YeaGreen是油性大分子产品,不能穿透细胞膜进入细胞内,不易挥发升华,人体不会吸入,经过艾姆斯氏和相关测试表明这两种染料无明显诱变性,是集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。

 

 

03

Marker选择

  

DNA Marker是分子量不同的DNA片段的组合,主要用途为DNA分子凝胶电泳时,与样品共同加入凝胶中进行电泳分离,通过样品条带与DNA Marker对应条带大小及亮度的对比,可以粗略估算样品DNA分子量的大小以及在溶液中的浓度。


目前翌圣生物DNA Marker分子量大小范围覆盖了从50 bp到15 kb的DNA片段,符合绝大多数实验需求。Marker上样量通常为5-10 μL,如果大分子条带弯曲、拖尾且分不开,可以将Marker原液2 µL稀释5倍加10 µL,条带清晰不拖尾。

 

 

小翌助您跑出完美的电泳图,每天都出好数据。

 

相关产品如下表所示,欢迎选购。

产品定位

产品名称

产品货号

规格

高质量琼脂糖

Agarose琼脂糖

10208ES60/76

100 g/500 g

Low Melting Point Agarose 低熔点琼脂糖

10214ES25/60

25 g/100 g

3:1 Agarose 3:1琼脂糖

10220ES25/60

25 g/100 g

High Sieving Agarose 高分辨率琼脂糖(PCR级)

10221ES08/25

5 g/25 g

Agarose Tablets 琼脂糖(片剂,0.5 g/片)

10226ES70

1盒(200片)

核酸染料

YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) YeaRed核酸染料(10,000× 水溶液)

10202ES76

500 μL

YeaGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000×in Water)

10204ES76

500 μL

DNA Marker

GoldBand DL2,000 DNA Marker

10501ES60

100 T

GoldBand DL600 DNA Marker

10502ES60

100 T

GoldBand DL5,000 DNA Marker

10504ES60

100 T

GoldBand 100 bp DNA ladder

10507ES60

100 T

 

翌圣生物科技(上海)股份有限公司 商家主页

地 址: 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元

联系人: 李自转

电 话: 400-6111-883、021-34615995-8075

传 真: 021-34615995-188

Email:lizizhuan@yeasen.com

相关咨询
ADVERTISEMENT