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CAR-T细胞基因转导

作者:欣博盛生物科技有限公司 2023-02-01T11:56 (访问量:2864)

转染试剂

稳定转染是效应T细胞稳定表达CAR的前提。目前用于CAR-T的基因转导的方法主要有逆转录病毒转导、慢病毒转导和mRNA转染。

Mirus公司的TransIT-VirusGEN®转染试剂可提高载体转染到贴壁或悬浮HEK 293细胞的效率,并有效提高重组腺相关病毒和慢病毒的产量。除了科研级别,Mirus还推出了临床前级别的TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent。TransIT-VirusGEN®SELECT转染试剂优于PEI和PEIpro®试剂,是临床前和早期临床试验中大规模病毒生产的理想选择。Mirus也计划推出GMP级别的TransIT-VirusGEN®转染试剂。

产品优势:

高效 — 实现高滴度病毒大规模生产中DNA高效转染

验证 — 经测试确认配方特性,无菌、低内毒素水平、无支原体

灵活 — 可与不同的重组病毒平台和细胞培养系统兼容

安全 — 完全合成的配方,无动物来源成分

CAR-T细胞基因转导

分别使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (3:1, vol:wt), 25 kDa PEI (4:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1, Polyplus Transfection)将第三代载体pLKO.1-puro-CMVTurboGFP™和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)( 3:0.5:0.5:2 DNA ratio, 1 μg/ml total plasmid DNA)转染至FreeStyle™ F17培养基中悬浮培养的FreeStyle™ 293-F细胞(A)和DMEM + 10% FBS中培养的贴壁293T/17细胞(C)生产慢病毒。用含病毒的上清液转导293T/17细胞,并在转导 ® 72小时后用Guava Easycyte™ 5HT流式细胞仪检测GFP表达情况。

CAR-T细胞基因转导

分别使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (2:1, vol:wt), 25 kDa PEI (2:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1 or 4:1, Polyplus Transfection)将pAAV-hrGFP, pAAV-RC和 pAAV Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 1.5 μg/ml plasmid DNA, Agilent Technologies)转染 至FreeStyle™ F17培养基中悬浮培养的FreeStyle™ 293-F细胞(B)及DMEM + 10% FBS中培养的贴壁293T/17细胞(D)生产腺相关病毒2型(AAV2)。用收集的病毒转导HT ® 1080细胞,转导48h后用Guava easyCyte™ 5HT流式细胞仪检测GFP表达情况。慢病毒和AAV的功能滴度都是根据GFP阳性细胞少于20%的病毒稀释度计算的。

TransIT-VirusGEN SELECT在悬浮和贴壁细胞培养系统中优于25 kDa线性PEI和PEIpro 转染试剂

品牌 产品编号 产品名称 规格
Mirusbio MIR 6700 TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent 1.5 ml
Mirusbio MIR 6703 0.3 ml
Mirusbio MIR 6704 0.75 ml
Mirusbio

MIR 6705

5x1.5 ml
Mirusbio MIR 6706 10x1.5 ml
Mirusbio MIR 6730 TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent 30 ml

美国品牌Cellbiolabs可提供一系列用于病毒表达、病毒包装、病毒浓缩和纯化、病毒滴度检测的研究工具。

病毒纯化试剂盒


品牌
产品编号 产品名称 规格 产品特点
Cell Biolabs VPK-5112 PureVirus™ Adenovirus Purification Kit 10 preps 操作时间小于2小时,无需超速离心,回收率>60%~70%
Cell Biolabs VPK-099 ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit 10 preps 使用特殊离心柱,操作时间小于2小时,回收率>90%
Cell Biolabs VPK-140 ViraBind™ AAV Purification Kit 10 preps

用于纯化AAV-2与AAV-DJ,3小时内获得纯度>95%的AAV病毒

Cell Biolabs VPK-140-T 2 preps
Cell Biolabs VPK-141 ViraBind™ AAV Purification Mega Kit 2 preps 用于纯化AAV-2与AAV-D,J 3小时内获得纯度>95%的AAV病毒,回收率>60%
Cell Biolabs VPK-141-5 10 preps

病毒滴度检测试剂盒

品牌 产品编号 产品名称 规格 产品特点
Cell Biolabs

VPK-107

VPK-107-5

VPK-107-T

QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit

(Lentivirus-Associated p24 ELISA)

96 assays

5x96 assays

32 assays

**技术将慢病毒相关p24蛋白与游离p24蛋白分开,避免传统方法检测总P24蛋白导致的误差
Cell Biolabs VPK-112 QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit 20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度

Cell Biolabs VPK-120 QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit 20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度来定量病毒滴度

Cell Biolabs VPK-110 QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit 2x96 assays ELISA方法,无需空斑形成实验,避免复杂的铺琼

脂步骤,操作更简便,耗时更短

Cell Biolabs VPK-109

VPK-109-T

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

100 assays

20 assays

免疫细胞化学方法,无需空斑形成实验,避免复

杂的铺琼脂步骤,操作更简便,耗时更短

Cell Biolabs VPK-106 QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit 20 assays

快速定量,操作过程45~60分钟

可检测纯化前或纯化后病毒核酸浓度来定量病毒滴度

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