Pierce BCA Protein Assay Kit 23225

描述

ThermoScientific Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒是一种双组分的高精度分析试剂，兼容去垢剂，可参照蛋白标准品来测量(A562nm)总蛋白浓度。

BCA蛋白定量分析试剂盒的特性：

 比色分析—可通过肉眼估计或使用标准分光光度计或酶标仪进行测量(562nm)
 高度均一性—相比染料结合方法具有较低的蛋白间差异
兼容性强—与多数离子和非离子型去污剂兼容
 适当快捷—更易操作，比经典的Lowry法快四倍
 高线性度—BSA的线性范围为20至2000?g/mL
 灵敏—改良操作，最小可以检测到5?g/mL 

相比其他兼容去垢剂的蛋白分析方法，PierceBCA蛋白定量分析试剂已被更多实验室接受并使用。它可以对蛋白质研究中的大多数类型的蛋白浓度进行精确测定，评估全细胞裂解物和亲和层析柱洗脱组分中的蛋白含量，还可用于监控工业化应用中的蛋白污染。相比大多数染料结合方法，BCA蛋白定量分析受蛋白组成差异的影响要小很多，从而具有更出色的蛋白间均一性。

应用：
研究蛋白：蛋白相互作用
在亲和层析操作之后检测特定洗脱组分
评估细胞提取物中膜蛋白的回收
高通量筛选融合蛋白

BCA蛋白定量分析检测蛋白的原理：
BCA蛋白定量分析结合了众所周知的蛋白在碱性介质中可将Cu²⁺还原为Cu¹⁺的能力以及使用二喹啉甲酸对一价铜离子(Cu¹⁺)进行高度灵敏的选择性比色检测方法。实验第一步是在碱性环境下使铜离子与蛋白质螯合形成浅蓝色复合物。在这一双缩脲反应中，含有三个或更多氨基酸残基的多肽可与铜离子在含酒石酸钾钠的碱性环境中形成有色的螯合复合物。

在第二步显色反应中，二喹啉甲酸(BCA)会与第一步中生成的还原性（一价铜）阳离子反应。两分子BCA与一个一价铜离子螯合可形成深紫色的反应产物。BCA/铜复合物可溶于水，随着蛋白浓度升高而在562nm出表现出强烈的线性吸收峰。BCA试剂相比第一步的浅蓝色产物要灵敏大约100倍左右（检测极限更低）。

BCA颜色形成的反应会受到蛋白质的氨基酸序列中四种氨基酸残基（半胱氨酸或胱氨酸、酪氨酸、色氨酸）的强烈影响。不过不同于考马斯染料结合法，普通的多肽骨架也有助于颜色形成，从而最小化由蛋白质组成差异造成的可变性。