克隆筛选-克隆与表达-试剂-生物在线

X-gal(20mg/ml)

IPTG 为安慰性诱导物,X-gal 为生色底物,二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG 可诱导载体Lac操纵子DNA 区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,该片段可与宿主细胞编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内互补(α 互补)。

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BL21(DE3)受体菌

特点: 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3 区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

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氨苄青霉素储存液(100mg/ml)

氨苄青霉素(Ampicillin)用双蒸水溶解过滤后配成的溶液。使用前须解冻后充分混匀;此溶液一般使用浓度为100ug/ml,按照100ml培养基中加入100ul(千分之一)的量加入,混匀。如果倒平板,请确保培养基不烫手时再加入

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氨苄青霉素储存液(100mg/ml)

氨苄青霉素(Ampicillin)用双蒸水溶解过滤后配成的溶液。使用前须解冻后充分混匀;此溶液一般使用浓度为100ug/ml,按照100ml培养基中加入100ul(千分之一)的量加入,混匀。如果倒平板,请确保培养基不烫手时再加入

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BL21(DE3)pLysS受体菌

该菌株带有质粒pLysS,具有氯霉素抗性。该质粒含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能降低目的基因的背景表达水平,

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Kanamycin ( 100mg/ml)卡那霉素

使用前须完全解冻,充分混匀;此溶液一般使用浓度为100ug/ml,按照100ml 培养基中加入100ul(千分之一)的量加入,混匀。如果倒培养基平板,请确保培养基不烫手时再加入。

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IPTG 溶液 (50mg/ml)

IPTG为安慰性诱导物,X-gal为生色底物,二者共同用于蓝白斑筛选。IPTG可诱导载体Lac操纵子DNA区段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段

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pET-32a(+)

pET-32a(+)是一种常用的融合蛋白类型原核高效表达载体,含有抗氨苄青霉素基因。表达由宿主细胞提供的T7RNA聚合酶诱导。

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